Ish paytida xoch ifloslanishining oldini olish uchun uni loyihalash, qurish va ekspluatatsiya qilishni boshqarishning asosiy talablari quyidagilardan iborat:
1. Laboratoriya konstruktsiyasi va qurilishi, xavfsiz ishlash tizimi yoki xavfsizlikning standart ish tartiblari amaldagi&kvotasi talablariga javob berishi kerak; Laboratoriya biologik xavfsizligi&"umumiy talablari"; GB19489.
2. PCR ish bosqichlariga ko'ra to'rtta funktsional sohaga, ya'ni reagentni saqlash va tayyorlash maydoni, namunani tayyorlash maydoni, amplifikatsiya maydoni va mahsulotni amplifikatsiya qilish sohasiga bo'linadi. Agar real vaqtda lyuminestsent PCR vositasi jihozlangan bo'lsa, kuchaytirish va mahsulotni tahlil qilish joylari birlashtirilishi mumkin. Har bir funktsional maydon aniq belgilanishi kerak, shuningdek turli funktsional sohalardagi jihozlar va buyumlar aralashtirilmasligi kerak.
PCR laboratoriyasining havo oqimi yo'nalishi reaktivni saqlash va tayyorlash zonasi → namunani tayyorlash maydoni → kuchaytirish maydoni → kuchaytirilgan mahsulotni tahlil qilish maydoni, amplifikatsiya qilingan mahsulotlarning havo oqimlari bilan birga oldindan kuchaytiriladigan maydonga kirishiga yo'l qo'ymaslik uchun amalga oshirilishi mumkin. Buni reagentni saqlash va tayyorlash maydoni → namunani tayyorlash maydoni → amplifikatsiya maydoni → amplifikatsiya mahsulotini tahlil qilish maydoni havo bosimini pasaytirish usulida amalga oshirish mumkin. Bunga egzoz fanatlari, salbiy bosimli egzoz qurilmalari yoki boshqa mumkin bo'lgan usullarni o'rnatish orqali erishish mumkin.
3. Har bir ish maydoniga kirish qat'iy ravishda bitta yo'nalishni, ya'ni reagentni saqlash va tayyorlash maydoni → namunani tayyorlash maydoni → kuchaytirish maydoni → mahsulotni kuchaytirish sohasini kuzatish kerak. Turli xil ish joylari (masalan, turli xil ranglar) ishlatilishi kerak. Ishchilar har bir ish joyidan chiqib ketganda ish kiyimlarini olib qo'ymasliklari kerak.
4. Laboratoriyani tozalash reagentlarni saqlash va tayyorlash zonasi → namunani tayyorlash maydoni → amplifikatsiya maydoni → kuchaytirilgan mahsulotni tahlil qilish yo'nalishi bo'yicha amalga oshirilishi kerak. Turli xil eksperimental maydonlar o'zaro ifloslanishni oldini olish uchun o'zlarining tozalash vositalariga ega bo'lishi kerak.
5. Ish tugagandan so'ng, ish joyini darhol tozalash kerak. Laboratoriya dastgohining ish joyidagi yuzasi natriy gipoxlorit kabi kimyoviy moddalarning zararsizlantirish va tozalash ta'siriga dosh bera olishi kerak. Laboratoriya dastgohi yuzasida ultrabinafsha nurlanishi qulay va samarali bo'lishi kerak. Ultrabinafsha nurlanishining masofasi va energiyasi zararsizlantirish effekti uchun juda muhim bo'lganligi sababli, harakatlanadigan ultrabinafsha chiroq (254 nm to'lqin uzunligi) ishlatilishi mumkin va ish tugagandan so'ng uni tajriba stolida 60-90 sm masofada nurlantirishga sozlash mumkin. . Kuchaytirilgan mahsulot atigi bir necha yuz yoki o'nlab taglik juftlik (bp) bo'lganligi sababli, UB nurlariga sezgir emas, shuning uchun UV nurlantirilgan amplifikatsiyalangan parcha ko'proq vaqt davomida, tercihen bir kechada nurlantirilishi kerak.
Reaktivlarni saqlash va tayyorlash zonasining vazifalari quyidagilardan iborat: saqlash reagentlarini tayyorlash, reagentlarni tarqatish va kuchaytirish reaktsiyasi aralashmasini tayyorlash, shuningdek, tsentrifuga naychalari va uchlari kabi sarf materiallarini saqlash va tayyorlash. Namuna tayyorlash uchun ishlatiladigan reagentlar va sarf materiallari kabi materiallar reagentni saqlash va tayyorlash joyiga to'g'ridan-to'g'ri olib borilishi kerak va kuchaytirgichni aniqlash joyidan o'tmasligi kerak. Kitdagi ijobiy nazorat materiallari va sifatni nazorat qilish materiallari ushbu hududda saqlanmasligi kerak, ammo bu hududda saqlanishi kerak. Namunalarni qayta ishlash maydoni.
Namunani tayyorlash maydonining vazifasi: nuklein kislotasini (RNK, DNK) olish, saqlash va kuchaytirish reaktsiyasi trubkasiga qo'shish. Klinik namunalarni o'z ichiga olgan operatsiyalar uchun biologik xavfsizlikning ikkinchi darajali laboratoriyalari uchun himoya vositalariga, shaxsiy himoya va ish sharoitlariga qo'yiladigan talablar bajarilishi kerak. Namunani aralashtirish va nuklein kislotani tozalash jarayonida aerozollar bilan ifloslanish sodir bo'lishi mumkinligi sababli, qo'shni hududlardan aerozol bilan ifloslanishiga yo'l qo'ymaslik uchun ushbu hududda ijobiy bosim sharoitlari yaratilishi mumkin. Namunalar orasidagi o'zaro ifloslanishni oldini olish uchun, sinov uchun nuklein kislotasini qo'shgandan so'ng, reaktsiya aralashmasini o'z ichiga olgan reaktsiya naychasini yopish kerak. Potentsial yuqumli materiallar uchun biologik xavfsizlik kabinetida qopqoq ochilishi kerak va namunalarni qayta ishlash va inaktivatsiya qilishning aniq tartiblari bo'lishi kerak.
Kuchaytirish zonasining vazifasi quyidagilardan iborat: DNK sintezi, DNKning kuchayishi va aniqlanishi. Aerozollar tufayli ifloslanishni oldini olish uchun, bu hududda yurishni minimallashtirish kerak. Shuni ta'kidlash kerakki, sinov qilingan barcha reaktsiya naychalari ushbu hududda ochilmasligi kerak.
Kuchaytirilgan mahsulotni tahlil qilish sohasining funktsiyasi quyidagilardan iborat: gibridlash, ferment hazm qilish elektroforez, yuqori mahsuldorlikdagi suyuqlikni tahlil qilish, tartiblash va boshqalar kabi kuchaytirilgan qismlarni keyingi tahlil qilish va aniqlash. Nuklein kislotasini kuchaytiradigan mahsulotlar turli xil tahlil usullariga ega, masalan, prob gibridlash usullari. membranalarda yoki mikroplatlar yoki chiplarda (radionuklidni etiketlash yoki radioaktiv bo'lmagan nuklidlarni markalash), to'g'ridan-to'g'ri yoki hazm qilingan agaroza gel elektroforez, poliakrilamid gel elektroforez, Janubiy o'tkazuvchanlik, nuklein kislotasini sekvestrlash usullari, massa spektrometri va boshqalar.
Kuchaytiruvchi mahsulotni tahlil qilish maydoni PCR laboratoriyasida amplifikatsiya mahsulotining ifloslanishining asosiy manbai hisoblanadi, shuning uchun kuchaytiruvchi mahsulotni ushbu sohadagi buyumlar va ish kiyimlari orqali olib ketmaslik uchun ehtiyot bo'lish kerak. Kuchaytirilgan mahsulotlarni aniqlash uchun PCR-ELISA usulidan foydalanganda, plitalarni yuvish uchun plastinka yuvish vositasi ishlatilishi kerak, chiqindi suyuqlik esa 1 mol / L HCl ga to'planishi kerak va laboratoriyada quyilishi mumkin emas, ammo ularni tashlab yuborish kerak. PCR laboratoriyasidan. Damla. Ishlatilgan uchi, shuningdek, 1 mol / L HCl eritmasiga namlangan bo'lishi kerak, so'ng kuyish kabi tartiblarga ko'ra axlat qutisiga solinishi kerak. Ushbu sohada ma'lum genetik mutatsiyalar va etidiy bromidi, akrilamid, formaldegid yoki radionuklidlar va boshqalar kabi zaharli moddalar ishlatilishi mumkinligi sababli, eksperimentchilarning xavfsizligini ta'minlashga e'tibor qaratish lozim.